Александр Малый
Доктор остеопат
и врач народной медицины
   
 
Доктор Александр Малый Задать вопрос доктору

Экспериментальное Исследование Наружного Лечения Диабетических Кожных Язв Посредством Применения Экстракта Полученного из Жука Стафилинида «Yi Bu A Jie (以布阿节)»

Аннотация: Цель: Исследовать  роль и механизм  медицинского  экстракта Yi Bu A Jie (以布阿节)  в наружном лечении  диабетических  кожных  язв  с точки зрения  поиска природного   препарата, прорывного  в области   медицины, предназначенного  для предотвращения  и лечения  диабетических  кожных язв. Методы: Была создана   модель  диабетических  накожных  язв у лабораторных  мышей.

Экстракт: Yi Bu A Jie  был получен  посредством  экстрактора  Сокслета. Две различных концентрации  экстракта (0.005 мг/мл и 0.01 мг/ мл ) наносились  на раны диабетических  кожных  язв один раз  в сутки  каждые   3 дня, при это наблюдались   локальные изменения внешнего вида  кожи, а также наблюдались  патолгогистологические изменения.

Результаты: Кратчайшее время заживления составило 25.25±2.06 дня при низкой  концентрации (P=0.0037 по сравнению  с группой, где использовалась  высокая  концентрация  33.14±2.21 дня; P=0.0082 по сравнения с контрольной  группой, 28.21±2.14 дней). Самый длительный период  заживления  отмечался  в группе с высокой концентрацией P=0.0025 по сравнению  с контрольной  группой).  В обеих  группах во время  экспериментального  периода  выделялось большое  количество воспалительных  нейтрофильных клеток. В группе с низкой  концентрацией, в ране появилась грануляционная  ткань с высоким содержанием  капилляров и активно растущими фибробластами, в тоже время  в группе  с высокой  концентрацией, отмечалось большое  количество  некротической   ткани. Вывод: экстракт  Yi Bu A Jie обладает ингибирующим  эффектом  на диабетические  кожные язвы  у мышей, при этом, более подходящей  является низкая концентрация  экстракта.

Ключевые  слова: Жук Педерус ( Yi Bu A Jie), наружная  терапия, диабет,  кожные язвы

Следуя принципам  Тибетской медицины и  медицины Мяо, Yi медицина   является  одной из трех основных  этнических  направлений  в медицине Китая, с комплексной   медицинской  теорией  и эффективными  клиническими  практиками. Yi медицина в частности играет важную роль в местной терапии, где отмечается гораздо больше свидетельств в сравнении с другими разновидностями  медицины. «Yi Bu A Jie (以布阿节)»  — это   жук Педерус, принадлежащий  к семейству жуков  Стафилинидов, отряда жесткокрылые.  Данное  семейство насчитывает  около 250  видов,(1), при этом 21 вид представлен  в Китае. (2,3)

Согласно  принципам Yi Медицины, относительно лекарственных препаратов  животного происхождения,,(4) согласно  принципам  китайской  фототерапии  в провинции  Юннань (5), а также согласно  другим рекомендациям, экстракт, полученный  из жука Падеруса  (Yi Bu A Jie) используется  для лечения цервикального лимфаденита, стригущего лишая, язв, нейродерматитов. Привычка  использовать  одну лечебную траву  для  лечения  заболеваний является  одной  их характеристик Yi медицины. Принимая   лечебную модель животного происхождении, в данной  исследовательской работе  рассматривались  роль  и механизм наружной терапии  применительно к диабетическим  кожным язвам посредством  использования  экстракта, полученного из жука Педеруса (Yi Bu A Jie) ,рассматривая  это, как нахождение открытия  в использовании  препарата природного  происхождения для предотвращения  и лечения  диабетических  кожных язв.

МЕТОДЫ

Препараты и  реагенты

Жуки  Педерусы (Yi Bu A Jie)  были собраны в районе  Чунмин, Шанхай, Китай.  Для получения  экстракта  из жука Педеруса (Yi Bu A Jie)   использовали экстрактор  Сокслет  с растворителем CH3CH2OH.  «Аллоксан» (Alloxan) был  приобретен в компании «Sigma», США, 25% этилкарбамат  (Серия №. T0033)  был приобретен  в Шанхае в компании  «Testmart Biotechnology Co., Ltd.), Китай, а также параформальдегид (Серия №. 104005) был приобретен   в компании « Y-Y Chemical reagents Co., Ltd»., Китай.

Экспериментальная  Аппаратура

 При  проведении   исследовательской  работы, использовалась следующая аппаратура: экстрактор Сокслет (Beijing Midwest Glass Instrument Co., Ltd., Китай), аналитические весы (NewClassic MS 303SE, Mettler Toledo, США), пипетка (Pipet-Lite XLS L-20, Rainin, США), устройство  для  контроля  уровня  сахара  в крови (OneTouchUltra, Johnson, США), и BX41-PBP микроскоп (Olympus, Япония)

© The Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine Press and Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2012 Supported by the Project of Shanghai Natural Science Foundation (No. 08JC1417000), and Research and Innovation Key Project of Shanghai Municipal Education Commission (No. 11ZZ120) 1. Department of Biology, College of Life and Environmental Sciences, Shanghai Normal University, Shanghai (200243), China; 2. Laboratory of Bone and Joint Pathology, State Administration of Traditional Chinese Medicine, Shanghai Shuguang Hospital, Shanghai (201203), China Correspondence to: Prof. WAN Ping, Tel/Fax: 86-21-57122226, E-mail: wanpcn@163.com DOI: 10.1007/s11655-012-1177-9

Животные

Тридцать  шесть самцов лабораторных  мышей, чистопородных, с весом  17.12±2.33 г, были представлены Центром  Экспериментальных  Животных  при  Шанхайском  Институте  Биологической  Продукции при  Министерстве  Здравоохранения [Разрешение №. SCXK (Шанхай) 2009-0020].

Группирование

Мыши   были  рандомизированы в 3  равные группы, по 12  мышей  в каждой  группе:  группа с низкой  концентрацией (0.005 мг/мл), группа с высокой  концентрацией (0.01 мг/мл), и  контрольная  группа (раствор CH3CH2OH без  экстракта  жука Педеруса (Yi Bu A Jie)).

Моделирование

Для индуцирования диабета,(6) животным  делали  инъекции свежеприготовленного3% Аллоксана при 150 мг/кг  (внутрибрюшной   инъекции). По  истечение  72 часов из дистального  отдела хвоста брали  образцы крови  для измерения  уровня  сахара в крови  при помощи коммерческого  анализатора. Уровни равные 10.0 ммоль/л указывало  на успешное  восстановление  диабетической  модели  в период  этой  фазы. Для развития  диабетических  кожных язв, спину мыши  выбивали, и после  проведения  стандартной  дезинфекции, с обеих сторон  позвоночника делались  разрезы  диаметром  1 см, глубоко  в  подкожную ткань при этом применялся  3% раствор  «pelltobarbitalum natricum» (25 мг/кг). После остановки  кровотечения, рана   перевязывалась  стерильной  марлей, затем животное возвращали в клетку и следили за  тем, как животное пьет воду  и поедает  пищу.

Лечение

На  3-й день после хирургической  операции, применяли капельницу для введения 0,5мл  экстракта, полученного из жука Педеруса (Yi Bu A Jie) в рану в группах  низкой  и высокой  концентрации один раз в 3 дня  (т.e., на 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 и 24 день после хирургической операции).

Общие наблюдения

На 9 –й день  и 21–й день  после хирургической операции (до применения  на рану экстракта, полученного  из жука Педеруса  (Yi Bu A Jie)), проводилось  обследование  диабетических  накожных  язв, и экссудация, кроме того, регистрировался  цвет и корокообразование на ранах.

Гистологическое наблюдение

Для каждой  из трех групп, было отобрано трое  мышей и подвержены  умерщвлению путем  цервикальной  дислокации. Ткани  из раны были помещены  в  3.7% парафармальдегид, промыты, высушены, и залиты воском, затем разрезаны ломтиками и подвержены стандартному гематоксилин-эозиновому окрашиванию.  Под оптическим микроскопом отслеживались  инфильтрация   воспалительной  клетки, эпитализация, кожная  структура, плотность колагеновых волокон, васкулярное  распределение итд.

Статистический  Анализ

Данные  были выражены, как среднее ± стандартное  отклонение. Статистический анализ  проводился  с использованием SPSS 13.0 программ. Сравнения  между группами  проводилось  посредством одностороннего дисперсионного  анализа переменных и использования t-критерия Стьюдента. A P величина, составляющая <0.05  считалась статистически  значимой.

РЕЗУЛЬТАТЫ

СРАВНЕНИЕ ПЕРИОДОВ  ЗАЖИВЛЕНИЯ  РАН  

Самый короткий период заживления ран — 25.25±2.06 дней, был зарегистрирован  в группе с низкой  концентрацией (P=0.0037  в сравнении   с группой  высокой  концентрации; P=0.0082  по сравнению с контрольной  группой). Самый  продолжительный  период  заживления  33.14±2.21 дня был зарегистрирован  в группе  с высокой  концентрацией (P=0.0025 в сравнении  с контрольной  группой),  в свою очередь, период заживления  в контрольной   группе  составил  28.21±2.14  дней.

 

Период заживления ран

Сравнение периодов  заживления ран  

Гистологическое Наблюдение

Через 9 дней  после лечения  большое  количество воспалительных  нейтрофильных  клеток  выделилось  в обеих  лечебных группах. В группе  с низкой  концентрацией, грануляционная  ткань, насыщенная  капиллярами  регенерировалась, и  появились активно растущие фибробласты, расположившиеся  параллельно  и перпендикулярно  поверхности, при этом, образуя  дугообразные  протрузии, а воспалительные клетки инфильтрировались  в грануляционную  ткань. Значительное  количество некротической  ткани появилось  в группе с высокой  концентрацией.  Между  цитоплазмой и  ядрами отсутствовал чистый край,  и были видны  фрагменты нейтрофилов  (Рис 2).

Рис 2. Гистологическое  наблюдение  в различных  временных точках (Окрашивание ГЭ х 200)

Примечания: A и D: контрольная группа; B и E: группа  низкой  концентрации; C и F: группа высокой  концентрации.

Через 21 день  в группе  низкой  концентрации, регенерированная  грануляционная  ткань распалась, абсорбировала внешние тела и заполнила  дефект, постепенно образуя  рубцовую ткань.  Вследствие  этого, язвы исчезли, однако  кожа  не полностью  восстановилась  до состояния  оригинальной  структуры. В группе высокой  концентрации отмечались признаки того, что некротические  клетки  постепенно  исчезали     (Рис 2).

ОБСУЖДЕНИЕ

 Проявление диабетических  кожных  повреждений  является  распространенным  осложнением у пациентов, страдающих  диабетом. Кожные повреждения  могут  происходить на  различных стадиях  заболевания  и могут  быть  вызваны метаболическими  нарушениями, васкуляторными нарушениями, нейропатией, кожной инфекцией  и разнообразными кожными реакциями, под воздействием препаратов. Кожные повреждения также ухудшают  диабетическое состояние и даже влекут за собой очень  серьезные последствия.

Yi медицинская  теория  предполагает, что человеческая кожа может  выполнять  защитную  функцию от проникновения  токсинов: поджелудочная железа относится к Земле, а кожа  к Металлу. Дифференциация диабетического заболевания  и кожных язв  согласно Yi медицине также отражает  взаимосвязь  между диабетом и кожными язвами: диабет  может  вызывать  появление кожных язв, а кожные язвы могут также  оказывать  влияние  на диабет после прогрессирования  на протяжение  определенного периода времени, что  свидетельствует о том, что для лечения диабета  и/или  кожных язв, необходимо  лечить диабет изнутри, а кожные язвы необходимо лечить, снаружи. Земля способна  генерировать Металл, а Металл способен уберечь  Землю.(7)

Механизм  появления диабетических язв не совсем понятен, и за последние несколько лет было предложено  множество  теорий: белковое гликозилирование, нейротрофический фактор голодания, микрососудистая травма, апоптозис восстанавливающихся клеток, банк «сухих» эпидермальных стволовых  клеток , и аномальная  воспалительная  реакция  итд. Апоптозис в  процессе заживления ран постепенно стал  центром внимания: в диабетических кожных язвах пролиферация  клеток  нарушается, следовательно, число пролиферативных клеток уменьшается, а апоптозные клетки  увеличиваются.(8)

Для лечения  диабетических  кожных язв в дополнение  к симптоматическому лечению (включая ограничение  активности, уменьшение  весовой нагрузки, поднятие  на возвышенность пораженных  конечностей, строгий гликемический контроль и активная коррекция кетоацидоза), вазодилатирующие препараты, такие как простагландин  E1, цилостазол и  654-2, а  также китайские препараты для активации кровообращения, такие, как «Бревискапин» широко  используются  в клинической практике. TКроме того, существуют  методы  лечения  с использованием гипербарической оксигинации, реваскуляризации, цитокиновой генной терапии, нервного питания, вакуум-герметизации, трансплантации антропометрической кожи  и аутогенного  кожного транспланта, итд..(9) Действие  экстракта, полученного из жука Педеруса  ( Yi Bu A Jie) заключается  в изгнании  « мутного  порока» и «токсической сухости», и развязать  «спектральный узел» посредством  использования его яда, в качестве  антидота, в чем  и заключается  уникальный характер Yi медицины.(4) Химический  состав  экстракта, полученного  из жука Педеруса (Yi Bu A Jie) является комплексным, с содержанием альдегидов, хинонов, терпенов. В нем  присутствует  в основном  три вида токсинов: C2H45O9N, C24H43O9N и C25H4O9N, с наивысшими  содержанием C2H45O9N, молекулярный вес которого  составляет  503.65. Мы исследовали  методы идентификации и очищения  для  токсина C2H45O9N посредством  использования жидкостной хроматографии/масс спектрометрии (10) Идентификация  of Национального Центра  Лекарственного Скрининга продемонстрировала, что экстракт, полученный из жука Педеруса  (Yi Bu A Jie) обладает  активностью (No. NC00136875). В данном исследовании экстракт, полученный из жука Педеруса  (Yi Bu A Jie) использовался  для лечения диабетических кожных язв, и полученные  результаты показали,  что период заживления  ран был самым  коротким  при использовании низкой концентрации 25.25±2.06 дней, а самый длинный  период  заживления  ран  отмечался  при  использовании  высокой концентрации  33.14±2.21 дня, а в контрольной  группе 28.21±2.14 дней. При  проведении  гистологических наблюдений, через 9 дней, в группе низкой  концентрации грануляционные  ткани насыщенные  капиллярами, регенерировались, при этом в ране  появились  активно растущие фибробласты, расположенные параллельно  и перпендикулярно  поверхности, образуя  дугообразные  протрузии, а воспалительные клетки инфильтрировались  в грануляционную  ткань. Значительное  количество некротической  ткани появилось  в группе с высокой  концентрацией. Значительное  количество некротической  ткани появилось  в группе с высокой  концентрацией.  Между  цитоплазмой и  ядрами отсутствовал чистый край,  и были видны  фрагменты нейтрофилов. Полученные  результаты продемонстрировали, что период заживления  ран  был  самым длительным при использовании  высокой концентрации, а самый  короткий, в  контрольной группе. Это  согласуется с результатами, полученными во время  проведения предыдущих исследований на других  природных продуктах .(11-16) Возможно потому что  высокая  концентрация  экстракта, полученного из жука Педеруса  ( Yi Bu A Jie) привела  к смерти  кожных клеток. Более детальный  механизм  требует  дальнейшего исследования.

Через 21 день  в группе  низкой  концентрации, регенерированная  грануляционная  ткань распалась, абсорбировала внешние тела и заполнила  дефект, постепенно образуя  рубцовую ткань.  Вследствие  этого, язвы исчезли, однако  кожа  не полностью  восстановилась  до состояния  оригинальной  структуры. В группе высокой  концентрации отмечались признаки того, что некротические  клетки  постепенно  исчезали.    Полученные  результаты продемонстрировали, что экстракт, полученный из жука Педеруса (Yi Bu A Jie) обладает  ингибиторным  влиянием  на диабетические  кожные язвы  у мышей путем улучшения клеточной пролиферации  и уменьшения  апотозиса, при этом низкая  концентрация является  более подходящей.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. HuJY, LiLZ, ZhaoMJ. A new species of the genus nazeris from Guizhou, China (coleoptera, staphylinidae, paederinae). Acta Zootaxonomica Sin (Chin) 2005;30:95-97.
  2. Zhu JW, Li LZ, Zhao MJ. A new species of the genus ischnosoma from China (coleoptera, staphylinidae, tachyporinae). Acta Zootaxonomica Sin (Chin) 2005;30:809-811.
  3. Zhao MJ, Li LZ, Hu JY, eds. The colorful world of insects. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press; 2005:59-63.
  4. He TC, Li GD, eds. Yi medicine animal drug. Chengdu: Sichuan Nationalities Publishing House;1986:128-129,130
  5. The Revolutionary Committee of Health Bureau, Yunnan Province. Chinese herbal medicine in Yunnan. Kunming:

Yunnan People’s Publishing House;1971:380-381.

  1. Li YH, Zhang DQ, Liu H, Wang Q, Li JQ. Effect of Tangziqing on lipid metabolism in mice with diabetes mellitus induced with alloxan. J Tianjin Univ Tradit Chin

Med (Chin) 2009;28:185-187.

  1. Yunnan College of Traditional Chinese Medicine, Yunnan Province Yi Medicine Hospital. Yunnan Yi nationalities medical and medicine. Yunnan Medicine (Volume Ⅰ). Kunming: Yunnan Science and Technology Press;2007:181.
  2. Tian KA. Research progress in skin lesions of diabetes. J Tianjin Med Univ (Chin) 2011;17:431-434.
  3. Huang X, Cui L, Cao YL. Tissue engineered skin in the treatment of diabetic skin ulcer research. J Tissue Engin Reconstruct Surg (Chin) 2007;3:287-289.
  4. Wan P, Li LZ, Zhao MJ, Hu JY. A kind of pederin identification method. National invention patents admissibility: No. 200810036245. 4
  5. Tian JQ, Zhu KR, Li XM, Song HY. Antioxidation activityof pleurotusnebrodensis mycelium polysaccharides in mice and its effect on senescence-resistance of fruit flies. Food Sci (Chin) 2006;27:223-225.
  6. Du LJ, Xing ST, Ru XB. Immunity in myocardiac hypertrophy rat and effect of total saponins of panax ginseng in vivo and in vitro. Chin Pharmacol Bull (Chin) 1996;12:84-86.
  7. Qiu X, Chen GH, Wang T. Effects of Huanglian Jiedu Decoction on free radicals metabolism and pathomorphism of the hippocampus in APP/PS1 double transgenic mice. Chin J Integr Tradit West Med (Chin) 2011;31:1379-1382.
  8. Wang XM, Fu J, Huang MQ. Effect of ethanol extracts of Kandelia candel on relevant indicators of rats with insulin resistance. China Tropic Med (Chin) 2010;10:677-678.
  9. Chen SS, Guo QS, Jin R. Effects of Rukuaixiao Decoction on hyperplasia of mammary gland in rats. China J Chin

Mater Med (Chin) 2007;32:1198-1102.

  1. Li Y, Peng C, Zhu LY. Study on the treatment of Paeoniflorin on visceral hypersensitivity irritable bowel syndrome. Pharm Clin Chin Mater Med (Chin) 2011;2(6):38-41.

(Получено  в декабре 12, 2010)

Отредактировано WANG Wei-xia


Создание сайта: студия Сергея Каминского © 2012 —2019 amaliy.com все права защищены