Александр Малый
Доктор остеопат
и врач народной медицины
   
 
Доктор Александр Малый Задать вопрос доктору

Метод дискриминации Педерина — Патент

Тезис

Данное  изобретение раскрывает  метод получения пробоподготовки из жука  рода  Педериус, а также  процесс  сбора  информации  при 100 кратном  разбавлении экстракта  Педериуса  с использованием   50% метанола для ВЭЖХ (Высокоэффективной Жидкостной Хромотографии), при этом  процесс  сбора  информации включает в  себя  следующие этапы:  соответствующее  сканирование  дилюента (раствора с продуктами экстракции Педериуса) в режиме регистрации отрицательных и положительных ионов с использованием  жидкой  хроматографии /масс спектрометрии  для получения максимальной величины  исходного  иона; путем  проведения  столкновения, вызванного  диссоциацией, и сканирования с использованием постколоночной системы ввода проб с насосами для сбора следовых проб  с целью получения пиковых данных дочернего иона. В методе  выделения  экстракта Педериуса используется  жидкостная хроматография  /масс спектрометрии для получения  следующих  характеристик: отличная  чувствительность, истинный  результат  дискриминации, эффективность и надежность, а также  комфортность  проведения операции для проведения клинического исследования экстракта Педериуса:

CN101266231B

CN Область применения

 Европейское Патентовое  Ведомство Find Prior Art

Другие  языки

Китайский

            Изобретатель

平 万

李利珍

胡佳耀

赵梅君

Оригинальный  Патентообладатель

上海师范大学

Дата приоритета

2008-04-18

Семейство: CN (1)

Дата/Статус  Номера Публикации

2008-04-18 CN 200810036245

2008-09-17 CN101266231A Применение

2011-05-25 CN101266231B Грант

Описание

Перевод с Китайского  языка

ОСНОВНЫЕ СВЕДЕНИЯ  Идентификация ядовитого педерусного  Пигмента в настоящем  исследовании  связана с методом  идентификации  пигмента ядовитого  насекомого жука Стафилинида, в частности с методом использования  жидкой хроматографии / масс-спектрометрии для  идентификации лекарственного  педерусного  пигмента.

ОСНОВНЫЕ СВЕДЕНИЯ   Ядовитый педерус – жук, принадлежащий  роду Paederus, семейство  которого насчитывает  более 250 известных видов, этот жук  распространен во всем мире, за исключением Антарктики. Китай  заявляет о том, что  на его территории  присутствует  21 вид лекарственных жуков  педерус. Ядовитый жук- педерус живет в основном на влажных  сельскохозяйственных  землях, среди овощей и сорняков и в оврагах, являются   распространенными  мелкими  насекомыми   в сельскохозяйственных  угодьях. Наши местные жуки-педерусы характеризуются  форменными зелеными  крылышками  — осенний  педерус ( также известный, как жук-педерус, обладающий  веретенным ядом, жук-педерус по виду, напоминающий  многоножку с  ножками желтого цвета),  жуки-педерусы в  виде черноногих  муравьев, волосатый жук-педерус, полотенцевидный ядовитый жук-педерус, красный ядовитый жук-педерус, ядовитый жук-педериус, захвативший государство,  Западный жук-педерус – семь видов  из которых представляют собой бескрылую молодь жука-педериуса. Эти разновидности жука-педериуса наиболее  широко распространены  в провинциях  и регионах  Тайваня.  В  яйцах  жука-педериуса, личинках, куколках, а также взрослых особях (с крыльями) присутствуют токсины. Токсичной  гемолимфой обладают в основном взрослые жуки педериусы, в организме, как женских, так и мужских особей  содержатся токсины .

 Ядовитый  токсин  жука-педериуса  используется для  предотвращения заражения  паразитарными химикатами.  Сложный  ядовитый токсин  жуков  Стафилинидов обладает  следующим  химическим составом: альдегиды, хиноны, терпены, и как утверждается, в основном  эти три вида  токсинов представляют собой  токсический  элемент жука-педериуса, обладающий  всеми  токсическими  факторами. Согласно  данному  патенту, токсичное  содержимое  жука Стафилинида с самым высоким уровнем пигмента, молекулярный  вес которого  составляет  503.65,  подлежит растворению в органическом  растворителе, таком, как, например, спирт, или хлороформ и бензол,  нерастворимые  в воде  кристаллы  педерина  таяли  при температуре 112°C в слабо подкисленной  кипящей воде на протяжение 1 часа. Свойства  педерина  при этом не разрушились.

Данным изобретением   установлено, что токсические экстракты жука педериуса способствуют  заживлению диабетических кожных язв, ингибирование клеточной линии HL-60   лейкемии у человека, ингибирование роста  клеточной линии BEL-7402  гепатомы  человека, а также  оказывает медицинский эффект на рост  волос.  Кроме того, токсический экстракт  жука-педериуса  обладает  широким спектром  применения,  и ожидается, что он будет  полезным в лечении диабетических кожных язв, лечении  определенных видов лейкемии и рака  печени человека, а также  в целях  создания  фармацевтической  формы. Однако еще предстоит определить метод получения ядовитого  экстракта жука-педериуса, так как  в процессе  проведения  клинических исследований  приходилось сталкиваться  с большими  трудностями по этому поводу.

 Цель настоящего  изобретения  заключается  в предоставлении метода идентификации лекарственного пигмента  жука-педериуса для того чтобы обеспечить удобство  в проведении клинических  исследований  по получению  ядовитого экстракта. Для того, чтобы решить  вышеупомянутую   техническую проблему, было найдено следующее   техническое  решение:

Метод идентификации   токсических факторов экстракта педериуса в данном  изобретении включает в себя обработку образцов  и процесс получения  данных, и характеризуется  следующей процедурой: токсический экстракт  педериуса  подлежал 100 кратному  разбавлению 50% метанолом для  ВЭЖХ.

Получение  первых данных осуществлялось  посредством сканирования с  использованием   жидкостной  хроматографии и масс спектометрии каждого элемента  экстракта педериуса  в режиме  регистрации  положительных ионов и соответственно  сканирование  дилюента (раствора с продуктами экстракции Педериуса) в режиме регистрации отрицательных  ионов для получения пиковых данных  исходного  иона.

Условия проведения  высокоэффективной  жидкостной  хроматографии: колонна Shiseido C18 / 100X 2. 1 мм  / 5 ед. Объемное соотношение  мобильной фазы 70: и  система, состоящая из метилового  спирта и раствора содержащего  формат аммония 30 мл, скорость   подвижной  фазы  составила 0. 2мл/мин, колонная температура составила 30 ° C, объем  вводимой  пробы составил  10  мкл.

Условия  масс-спектрометрии:  наличие  источника ионизации – турбоэлектрический  ионизатор , тройного  квадрупольного  детектора массы, распылителя  воздуха 13л / мин, газа  с воздушной  завесой -12 л / мин, напряжение  распылителя  5KV, фокусирующее  напряжение 400V, входное напряжение 10V, напряжение выходного  порта  10V,  температура  вспомогательного  нагревателя 450 ° C и диапазон изменения  массы  —  400~800 атомной  массовой  единицы.

Получение пиковых  данных   исходного  иона:

Пиковое  время удерживания  tK = 4.0 мин,  пик  эксимерного иона  [MH]  — m / z (заряд массы) = 502. 4,  и пиковая  величина  ионов — аддуктов  формиата [m + HCOO] m / z (заряд массы)  = 548. 4, при пиковой величине  ионов – аддуктов натрия [m + Na] +  m / z (заряд массы)   = 526. 4;

Затем  при  использовании поршневого насоса после введения колонны и столкновения, вызванного  диссоциацией, в результате сканирования  были получены  следующие  данные  пиковой  величины  субиона : m / z 470, m / z 438, m / z 502. 2, m / z 470, m / z 438, m / z 494. 2, m / z462. 2, m / z 340.

Идентификация токсического пигмента педериуса, представленный  в данном  исследовании  предусматривает  использование жидкостной  хроматографии – системы  масс-спектрометрии, так как этот метод аутентификации  обладает превосходной  чувствительностью,  точной  результативностью дискриминации, эффективностью, надежностью, легкостью проведения  операции  в клинических  исследованиях  лечебного   экстракта  педериуса .

Краткое  описание представленных  в патенте  изображений

 Рис. 1  — яд педериуса  0~8 мин хроматография экстрактов дилюентов в режиме  регистрации  отрицательных  ионов;

 Рис. 2 яд педериуса  0~8 мин хроматография экстрактов дилюентов в режиме  регистрации  положительных  ионов;

 Рис. 3  пиковая  величина исходного  иона  (tK = 4. 0 мин) масс спектра в режиме регистрации отрицательного иона;

Рис  4 пиковая  величина исходного  иона  (tK = 4. 0 мин) масс спектра в режиме регистрации положительного иона;

Рис 5   m / z = 526.4 масс спектра дочернего иона;

Рис. 6   m / z = 548.4  дочерний ион, масс спектра ионов;

Рис. 7  m / z = 502.2 дочерний ион, масс спектра ионов;

Рис. 8  токсическая химически  молекулярная формула состава элемента  педериуса.

ДЕТАЛЬНОЕ ОПИСАНИЕ

В дальнейшем  настоящее  исследование  иллюстрируется  примерами, единственная  цель которых  заключается  в предоставлении   лучшего понимания  данного изобретения, не ограничиваясь его  содержанием.

Пример

Обработка образца

  1. Лекарственный экстракт педериуса  подлежал 100 кратному  разбавлению 50% метанолом для  ВЭЖХ .
  2. Получение данных

Полученные данные

  1. a) пиковые данные исходного иона

 Условия проведения  высокоэффективной  жидкостной  хроматографии: колонна Shiseido C18 / 100X 2. 1 мм  / 5 ед. Объемное соотношение  мобильной фазы 70: и  система, состоящая из метилового  спирта и раствора содержащего  формат аммония 30 мл, скорость   подвижной  фазы  составила 0. 2мл/мин, колонная температура составила 30 ° C, объем  вводимой  пробы составил  10  мкл.

Условия  масс-спектрометрии:  наличие  источника ионизации – турбоэлектрический  ионизатор , тройного  квадрупольного  детектора массы, распылителя  воздуха 13л / мин, газа  с воздушной  завесой -12 л / мин, напряжение  распылителя  5KV, фокусирующее  напряжение 400V, входное напряжение 10V, напряжение выходного  порта  10V,  температура  вспомогательного  нагревателя 450 ° C и диапазон изменения  массы  —  400~800 атомной  массовой  единицы.

Регистрация  каждого образца  лекарственного экстракта  педериуса  в режиме отрицательного иона, а дилюента с продуктами экстракта – в режиме положительного  иона для получения хроматографии 0~8 мин  при регистрации  в  различных режимах  ионизации (Рис 1 и Рис. 2),  на обоих  рисунках  видно, что tK = 4. 0 мин  при  общих  пиковых величинах.

Общая  пиковая   величина  в режиме  регистрации  отрицательного  иона  и положительного  иона , масс спектра (tK = 4.0min) (Рис. 3  и  Рис. 4)  отображает: m / z = 502.4  что касается  токсических ионов гормонов  педериуса.  Квази-молекулярный  ионный  состав   может выражаться   следующим образом: [MH]  ; m / z = 548.4  для ионов-аддуктов, состав ядовитого компонента педериуса   с молекулами   формиата, выражается  следующим образом: [m + HCOO] -; m / z = 526. 4  ионы-аддукты  молекулы токсического гормона  педериуса  с ионами  натрия  может выражаться  следующим образом :[m + Na]+.

б) Получение  пиковых  ионных данных

Поршневой насос после введения колонны ,-  m / z = 526. 4,548. 4,502. 2  для  ионной регистрации  дилюента  с токсическим  экстрактом жуков  Стафилинидов при скорости  добавления  10мкл / мин,  столкновение   с воздухом  7л / мин.

На  Рис  5 можно увидеть, m / z = 526.4  масс спектр  дочернего иона  при  m / z = 494. 2, m / z = 462. 2, и m / z = 340,  где m / z = 494. 2, m / z = 462. 2 как [m + Na] + CH3OH   с потерей энергии дочернего иона , m / z = 340  ион   формируется, как карбонильная  группа  с расщеплением  боковой  цепи.

 На  Рис  6 , m / z = 548.4  масс спектр  дочернего иона  с  m / z = 502. 2, m / z = 470 и m / z = 438, где m / z = 502. 2  является  подкреплением   m / z = 548. 4 ([m +  взаимосвязь  с  HCOO] и [MH]  в, m / z = 470, m / z = 438  [MH]  +  потеря энергии  ионов CH3OH.

Рис 7, m / z = 502.2 масс спектр дочернего  иона  m / z = 470  и m / z = 438,  который является  [MH]  потерей энергии  дочерних ионов CH3OH.

 Анализ  выше приведенных данных показывает:  tK = 4. 0 мин,  соответствие  пиковых величин множественности  компонентов  в молекулярной структуре  групп CH3O, Тандемная масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением  компонента способствует  легкому  формированию   ионов-аддуктов, молекулярного  веса  503,  а также  полностью  согласуется  с  токсикологическими факторами  химических  характеристик молекулярной структуры компонента полученного  от жуков   Стафилинидов, на основании чего  можно предполагать, что  описанные методы идентификации  лекарственного  элемента педериуса  в настоящем исследовании  способны точно определить  токсический элемент  лечебного экстракта полученного от жука педериуса.

___________________________________________________________________________________________________

Примечание: данная версия  патента  является сокращенной, без предоставления  изображений.  Данный документ представлен на сайте для  ознакомления целевой аудитории с  разработками лечебного  препарата на основе  педерина, которые ведутся в мире на сегодняшний день.

 

 


Создание сайта: студия Сергея Каминского © 2012 —2021 amaliy.com все права защищены